臺灣地區(qū)擬制定食品中氯霉素類抗生素殘留量的檢驗方法

    2014年3月13日，臺灣地區(qū)"衛(wèi)生福利部"發(fā)布部授食字第1031900266號公告，預(yù)告制定"食品中動物用藥殘留量檢驗方法-氯霉素類抗生素之檢驗"草案，20日內(nèi)接收公眾意見或建議。

    食品中動物用藥殘留量檢驗方法-氯霉素類抗生素之檢驗草案

    1.  適用范圍：本檢驗方法適用于農(nóng)畜禽水產(chǎn)品之肌肉、蛋類、內(nèi)臟、乳汁及蜂蜜中氯霉素（chloramphenicol）、甲磺氯霉素（thiamphenicol）、氟甲磺氯霉素（florfenicol）及氟甲磺氯霉素胺（florfenicol amine）之檢驗。

    2.  檢驗方法：檢體經(jīng)萃取及凈化后，以液相層析串聯(lián)質(zhì)譜儀（liquid chromatograph/tandem mass spectrometer, LC/MS/MS）分析之方法。

    2.1. 裝置：

    2.1.1. 液相層析串聯(lián)質(zhì)譜儀：

    2.1.1.1. 離子源：電灑離子化（electrospray ionization, ESI）。

    2.1.1.2. 層析管：XSELECT HSS PFP,2.5 μm,內(nèi)徑 2.1 mm × 10 cm ,或同級品。

    2.1.2. 離心機（Centrifuge）：可達(dá)3200 × g以上者。

    2.1.3. 振蕩器（Shaker）。

    2.1.4. 均質(zhì)機（Homogenizer）。

    2.1.5. 氮氣蒸發(fā)裝置（Nitrogen evaporator）。

    2.1.6. 固相真空萃取裝置（Solid phase extraction vacuum manifolds）。

    2.1.7. 旋渦混合器（Vortex mixer）。

    2.2. 試藥：甲酸與甲醇均采用液相層析級；正己烷、乙酸乙酯、氨水（30%）、三氯醋酸（trichloroacetic acid）及醋酸均采用試藥特級；去離子水（比電阻于 25℃ 可達(dá) 18 MΩ/cm以上）；氯霉素、甲磺氯霉素、氟甲磺氯霉素及氟甲磺氯霉素胺對照用標(biāo)準(zhǔn)品；chloramphenicol-d5、thiamphenicol-d3、florfenicol-d3及florfenicol amine-d3同位素內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)品。

    2.3. 器具及材料：

    2.3.1. 容量瓶：1 mL及100 mL.

    2.3.2. 離心管：50 mL,PP材質(zhì)。

    2.3.3. 固相萃取匣（Solid phase extraction cartridge）：Oasis MCX,6 mL,150 mg,或同級品。

    2.3.4. 濾膜：孔徑0.22 μm,PVDF材質(zhì)。

    2.4. 試劑調(diào)制

    2.4.1. 50%甲醇溶液：

    取甲醇50 mL,加去離子水使成100 mL.

    2.4.2. 5%醋酸溶液：

    取醋酸5 mL,加去離子水使成100 mL.

    2.4.3. 5%三氯醋酸溶液：

    稱取三氯醋酸50 g,以去離子水溶解使成1000 mL.

    2.4.4. 含0.6%氨水之乙酸乙酯溶液：

    取氨水20 mL,加乙酸乙酯使成1000 mL.

    2.4.5. 含3%氨水之甲醇溶液：

    取氨水10 mL,加甲醇使成100 mL.

    2.4.6. 25%甲醇溶液：

    取甲醇25 mL,加去離子水使成100 mL.

    2.5. 移動相溶液之調(diào)制：

    2.5.1. 移動相溶液A:

    取甲酸1 mL,加去離子水使成1000 mL,以濾膜過濾，取濾液供作移動相溶液A.

    2.5.2. 移動相溶液B:甲醇。

    2.6. 標(biāo)準(zhǔn)溶液之配制：

    取氯霉素、甲磺氯霉素、氟甲磺氯霉素及氟甲磺氯霉素胺對照用標(biāo)準(zhǔn)品各約10 mg,?確稱定，分別以50%甲醇溶液溶解并定容至100 mL,作為標(biāo)準(zhǔn)原液，于 -20℃ 貯存。臨用時分別取適量各標(biāo)準(zhǔn)原液混合，以50%甲醇溶液稀釋至0.003~2.5 mg/mL,供作標(biāo)準(zhǔn)溶液。

    2.7. 內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)溶液之配制：

    取chloramphenicol-d5、thiamphenicol-d3、florfenicol-d3及florfenicol amine-d3同位素內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)品各約10 mg,?確稱定，共置于100 mL容量瓶中，以50%甲醇溶液溶解并定容，供作內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)溶液，于 -20℃ 貯存。

    2.8. 檢液之調(diào)制：

    2.8.1. 萃取：

    2.8.1.1. 肌肉：

    將檢體細(xì)切均質(zhì)后，取約5 g,精確稱定，置于離心管中，加入內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)溶液50 mL及含0.6%氨水之乙酸乙酯溶液20 mL,旋渦混合1分鐘，振蕩10分鐘，以3200×g離心10分鐘，取上清液。加入5%醋酸溶液2 mL,旋渦混合1分鐘，取下層液，于45℃水浴中以氮氣濃縮至約2 mL,加入5%醋酸溶液4 mL,旋渦混合后，供凈化用。

    2.8.1.2. 蛋與內(nèi)臟：

    將檢體混勻后，取約5 g,精確稱定，置于離心管中，加入內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)溶液50 mL及5%三氯醋酸溶液20 mL,旋渦混合1分鐘，振蕩10分鐘，以3200×g離心10分鐘，取上清液，加入正己烷20 mL,旋渦混合1分鐘，以3200×g離心5分鐘，取下層液供凈化用。

    2.8.1.3. 乳汁：

    將檢體混勻后，精確量取5 mL,置于離心管中，加入內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)溶液50 mL及5%三氯醋酸溶液20 mL,旋渦混合1分鐘，振蕩10分鐘，以3200×g離心10分鐘，取上清液供凈化用。

    2.8.1.4. 蜂蜜：

    將檢體混勻后，取約5 g,精確稱定，置于離心管中，加入內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)溶液50 mL及5%醋酸溶液10 mL,旋渦混合1分鐘，振蕩10分鐘，供凈化用。

    2.8.2. 凈化：

    取2.8.1.節(jié)供凈化用溶液，注入預(yù)先以甲醇5 mL及去離子水 5 m L潤洗之固相萃取匣，棄流出液，以5%醋酸溶液5 mL流洗，棄流出液，再以含3%氨水之甲醇溶液5 mL沖提，收集沖提液，于45℃水浴中以氮氣濃縮至干，再以25%甲醇溶液定容至1 mL,經(jīng)濾膜過濾后，供作檢液。

    2.9. 基質(zhì)匹配檢量線之制作：

    取空白檢體，不添加內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)溶液，依2.8.節(jié)萃取、凈化及以氮氣濃縮至干后，分別添加不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5 mL及內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)溶液50 mL,再以去離子水定容至1 mL,經(jīng)濾膜過濾后，依下列條件進行液相層析串聯(lián)質(zhì)譜分析。就各氯霉素類抗生素與內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)品之波峰面積比，與對應(yīng)之各氯霉素類抗生素濃度，制作基質(zhì)匹配檢量線。

    液相層析串聯(lián)質(zhì)譜測定條件（注）：

    層析管：XSELECT HSS PFP,2.5 μm,內(nèi)徑2.1 mm × 10 cm.

    移動相溶液：A液與B液以下列條件進行梯度分析

    更多檢測方法請見：http://www.xmtbt-sps.gov.cn/detail.asp?id=45928