最近，浙江大學(xué)農(nóng)學(xué)院包勁松教授團(tuán)隊(duì)在Journal of Agricultural and Food Chemistry、Carbohydrate Polymers和International Journal of Molecular Sciences等雜志發(fā)表3篇研究論文，揭示水稻淀粉分支酶IIb（BEIIb）突變體（be2b）抗性淀粉含量增加伴隨產(chǎn)量下降的分子機(jī)制、抗性淀粉精細(xì)結(jié)構(gòu)形成機(jī)制及抗性淀粉生物合成的分子機(jī)制。

 

　　水稻是我國最重要的糧食作物之一。淀粉是水稻胚乳的主要組分，約占精米干重的90%，主要由直鏈淀粉和支鏈淀粉組成。研究表明，攝入適量高抗性淀粉的稻米可以防止餐后血糖水平的急劇上升，并對(duì)糖尿病、肥胖癥和慢性腸病等起到積極預(yù)防作用。然而，普通水稻品種的抗性淀粉含量非常低（<2%），解析水稻高抗性淀粉形成機(jī)制對(duì)創(chuàng)制高抗性淀粉水稻品種具有重要指導(dǎo)作用。

 

　　BEIIb基因是影響抗性淀粉含量的重要基因。利用CRISPR/Cas9基因編輯獲得水稻日本晴BEIIb突變體（be2b），其抗性淀粉含量較野生型WT增加了將近10倍，直鏈淀粉含量增加了1.4倍。但是，突變體的千粒重顯著下降。多組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，be2b胚乳中AMY2A和Pho等酶上調(diào)表達(dá)誘導(dǎo)淀粉降解，同時(shí)糖酵解相關(guān)蛋白的上調(diào)刺激了碳水化合物通過3-磷酸甘油酸進(jìn)行能量物質(zhì)的重新分配。SUS、UGP2和malZ等酶上調(diào)表達(dá)導(dǎo)致蔗糖、葡萄糖和果糖的積累。PK、ALT、GLN和GOT等酶的上調(diào)表達(dá)導(dǎo)致氨基酸及三羧酸循環(huán)中間產(chǎn)物的積累，其中檸檬酸和異檸檬酸的含量為野生型的21.2倍，顯著降低了be2b中能量物質(zhì)的轉(zhuǎn)化效率。此外，一系列乙酰輔酶A合成相關(guān)酶的下調(diào)又進(jìn)一步降低了能量轉(zhuǎn)化為儲(chǔ)藏物質(zhì)的效率。因此，這些效應(yīng)共同作用導(dǎo)致了BEIIb突變后千粒重顯著下降。

 

　　對(duì)秈稻be2b突變體灌漿期胚乳發(fā)育過程中淀粉精細(xì)結(jié)構(gòu)研究發(fā)現(xiàn)，be2b胚乳發(fā)育各階段均比野生型（WT）具有更高的直鏈淀粉含量及更多的支鏈淀粉長鏈，從而能夠形成更高的抗性淀粉含量。be2b淀粉晶體結(jié)構(gòu)由開花后5和10天的C型轉(zhuǎn)變?yōu)榛ê?5天的B型，而WT在所有發(fā)育階段均為A型。與A型和C型淀粉相比，B型淀粉通常具有更長的支鏈淀粉側(cè)鏈且分支點(diǎn)間距較大，因而具有更高的抗消化性能。但在發(fā)育進(jìn)程中， WT和be2b中直鏈淀粉含量和支鏈淀粉A鏈比例均逐漸增加，而B2、B3鏈和平均鏈長均逐漸下降。

 

　　在淀粉生物合成過程中，淀粉合成相關(guān)酶通過蛋白質(zhì)互作形成多酶復(fù)合體行使功能。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，隨著胚乳的發(fā)育，在開花后10天WT胚乳中形成的復(fù)合體數(shù)量逐漸增多，開花后10、15天復(fù)合體逐漸增大，這樣有助于淀粉的高效合成。但be2b中各個(gè)時(shí)期的蛋白復(fù)合體數(shù)量明顯小于WT，且復(fù)合體分子量也明顯變小，從而阻礙了淀粉的有效合成，形成結(jié)構(gòu)變異的淀粉，但這種淀粉的抗消化性能提高。

 

　　該研究成果與江西師范大學(xué)、廣西農(nóng)科院等單位合作完成，并得到國家自然科學(xué)基金、浙江省自然科學(xué)基金等項(xiàng)目的資助。目前，該團(tuán)隊(duì)正在采取多種技術(shù)手段尋找BEIIb的調(diào)控因子和新互作蛋白，以期培育出更高抗性淀粉的水稻品種。

 

　　論文鏈接：

 

　　1. Chen Y, Luo L, Xu FF, Xu X, Bao JS （2022） Carbohydrate repartioning in rice starch branching enzyme IIb mutant stimulates higher resistant starch content and lower seed weight revealed by multi-omics analysis. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 70（31）： 9802–9816. https://doi.org/10.1021/acs.jafc.2c03737

 

　　2. Ying Y, Zhang Z, Tappiban P, Xu FF, Deng GF, Dai GX, Bao JS （2022） Starch fine structure and functional properties during seed development in BEIIb active and deficient rice. Carbohydrate Polymers, 29, 119640. https://doi.org/10.1016/j.carbpol.2022.119640

 

　　3. Ying Y, Xu FF, Zhang Z, Tappiban P, Bao JS. （2022） Dynamic change in starch biosynthetic enzymes complexes during grain-filling stages in BEIIb active and deficient rice. International Journal of Molecular Sciences, 23,10714. https://doi.org/10.3390/ijms231810714