急性經(jīng)口毒性實(shí)驗(yàn)方法的比較與選擇

OECD TG420-固定劑量法

（HDP）

OECD TG423-分級(jí)試驗(yàn)法

（ATC）

OECD TG425-上下移位法

（UDP）

方法的發(fā)展

1984年英國(guó)毒理協(xié)會(huì)提出，OECD 2001年作為指南TG420

1990年Sumiey提出，OECD于1996年采用，于2001年更新列為指南TG423。目前歐洲使用此方法比較普遍。

1948年Dixon和Mood首次提出，OECD于1998年采用，2006年更新列為指南TG425。

原理簡(jiǎn)介

固定5,50,300,2000mg/kg四個(gè)劑量組，（必要時(shí)可以增加5000mg/kg)，依次使用同一性別的動(dòng)物（一般為雌性），經(jīng)口染毒。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，確定會(huì)發(fā)生毒性反應(yīng)，但不產(chǎn)生嚴(yán)重的毒性反應(yīng)或死亡的劑量作為起始劑量進(jìn)行試驗(yàn)，再根據(jù)觀察的結(jié)果調(diào)整毒性劑量，當(dāng)出現(xiàn)以下情況時(shí)終止試驗(yàn)：1，當(dāng)出現(xiàn)明顯的毒性反應(yīng)或已確認(rèn)不多于1只動(dòng)物死亡；2，最高劑量未出現(xiàn)毒性反應(yīng)；3，最低劑量動(dòng)物出現(xiàn)死亡。

試驗(yàn)分為若干階段，每階段使用3只動(dòng)物，最多6只動(dòng)物。已設(shè)計(jì)四個(gè)固定的劑量5,50,300,2000mg/kg，選定一個(gè)初始劑量進(jìn)行試驗(yàn)，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果（動(dòng)物死亡或者瀕臨死亡的動(dòng)物數(shù)量）來(lái)判定是否進(jìn)行下一步試驗(yàn)或者終止試驗(yàn)。有三種可能的結(jié)果：1，無(wú)需進(jìn)一步試驗(yàn)即可分級(jí)；2，同一劑量水平再做3只動(dòng)物；3，在高一級(jí)或低一級(jí)劑量水平另做三只動(dòng)物。

由限度試驗(yàn)和主試驗(yàn)組成，限度試驗(yàn)分為2000mg/kg和5000mg/kg兩個(gè)劑量水平，用于受試物毒性較小的情況，兩種劑量限度試驗(yàn)過(guò)程有細(xì)微差別，但最多只用5只動(dòng)物。主試驗(yàn)是一個(gè)預(yù)先設(shè)定的染毒程序，每次染毒1只動(dòng)物，有1只動(dòng)物染毒后的反應(yīng)決定第2只動(dòng)物接受染毒的劑量，若動(dòng)物存活，第2只動(dòng)物給予高一級(jí)劑量，若第1只動(dòng)物死亡或出現(xiàn)瀕臨死亡的狀態(tài)，則第2只動(dòng)物給予低一級(jí)別劑量。在對(duì)每只染毒動(dòng)物觀察48小時(shí)候，可以決定是否對(duì)下一只動(dòng)物染毒以及確定染毒劑量。當(dāng)滿足停止試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，可以結(jié)束試驗(yàn)。

每次使用動(dòng)物數(shù)量

5-7只

平均7只

6-9只

每次試驗(yàn)動(dòng)物死亡數(shù)量

1只

2-3只

2-3只

每劑量水平使用動(dòng)物數(shù)

5只

3只

1只

全部試驗(yàn)最多所需動(dòng)物數(shù)

20只

12只

15只

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)

只需10～20只動(dòng)物（預(yù)試一般不超過(guò)5只動(dòng)物；主實(shí)驗(yàn)：每個(gè)劑量最少用10只動(dòng)物，雌雄各半）

6-12只動(dòng)物 （2000mg/kg 限量試驗(yàn):6只動(dòng)物; 5000mg/kg: 3只動(dòng)物; 主實(shí)驗(yàn):最多12只） 

限量試驗(yàn): 最多5只； 主實(shí)驗(yàn): 通常4-6只，最多15只

劑量選擇

限量實(shí)驗(yàn): 2000 or 5000mg/kg bw; 主實(shí)驗(yàn): 5,50, 300, 2000mg/kg bw

限量實(shí)驗(yàn): 2000 or 5000mg/kg bw;主實(shí)驗(yàn): 5,50, 300, 2000mg/kg bw

限量實(shí)驗(yàn): 2000 or 5000mg/kg bw;  1.75 、5.5 、17.5 、55 、175 、550 、2000 mg/kg （或有特殊要求時(shí)1.75 、5.5 、17.5 、55 、175 、550 、1750 、5000 mg/kg

觀察的指標(biāo)

不以動(dòng)物死亡作為研究的終點(diǎn)，而是以毒性發(fā)展的臨床體征的觀察作為終點(diǎn)，對(duì)化學(xué)品急性毒性進(jìn)行分類(lèi)。

用于危害評(píng)估危害分類(lèi)，以及危害度評(píng)價(jià)，它是以動(dòng)物死亡作為試驗(yàn)終點(diǎn)的分階段試驗(yàn)法。

以動(dòng)物的死亡作為研究的重點(diǎn)，同時(shí)進(jìn)行毒性表現(xiàn)的觀察。

LD50的值和置信度

不能精確估計(jì)LD50的值和LD50的置信限，但是可以粗略的估計(jì)LD50的范圍。同樣對(duì)于死亡劑量反應(yīng)曲線的斜率和置信限也無(wú)法估計(jì)。

不能精確估計(jì)LD50的值和LD50的置信限，但是可以根據(jù)提供的數(shù)據(jù)使用最大相似法進(jìn)行計(jì)算。該方法也適用于死亡劑量反應(yīng)曲線的斜率和置信限的估計(jì)。

不但可以進(jìn)行毒性表現(xiàn)的觀察，還可以估算LD50及其可信度，適用于能引起動(dòng)物快速死亡的受試物。不適用于有遲發(fā)型毒性反應(yīng)特點(diǎn)的物質(zhì)。

應(yīng)用情況

采用這種方法的實(shí)驗(yàn)室較少

普遍使用，大部分國(guó)家接受

美國(guó)、中國(guó)推薦使用

特點(diǎn)

固定劑量、觀察動(dòng)物反應(yīng),不以死亡為依據(jù),而且按毒性癥狀來(lái)判斷該物質(zhì)的危險(xiǎn)程度

每階段3只動(dòng)物，2-4階段即可判定急性毒性。死亡動(dòng)物數(shù)一般不超過(guò)3只。

節(jié)省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，同時(shí)，不但可以進(jìn)行毒性表現(xiàn)的觀察，還可以估算LD50 及其可信限。死亡動(dòng)物數(shù)一般不超過(guò)3只。